有效液相色诺(简称HPLC)是色一賠法中重要的一一个分支,它不仅能分离高沸点极性和热不稳定的化合物,而且适合于离子性、大分子及具有生物活性的化合物HPLC分离后的样品组分很容易收集,故能用于制备分离。HPLC有多种分离模式,检测器则主要有UV-Vis、示差折光、荧光光普、电化学及质谱等。这里仅以Waters510HPLC仪器为例，介绍其结构与操作。
Waters5lOHPLC仪器的结构示意图见图II-34。仪器流程如下:由高压泵输入系统,样品用注射器从进样阀引入,吸光度信号经放大后由记录仪记录。
操作方法
1.准备流动相
液相色谱要求流动相需要纯度高,所有溶剂(包括水)须是HPLC级的。Waters510泵为单元泵,故流动相若为混合溶剂,则需要在使用前混合好，然后进行过滤和脱气。
2.泵的操作
Waters5l0泵用数码轮设定流量,旋钮设定压力上限。操作简单直观。
注意的主要问题是:
(1)通电之前,流量设为0.0mL·min-1,。先用10mL专用注射器从排液阀抽去泵前管路中可能有的气泡,然后通电,再设定流量。
(2)分析样品前应设定上限压力,以保护色谱柱。一般15cm长的色谱柱其压力上限可设为2x104kPa,当压力超过时,泵会自动停止工作。待排除故障后,按“Reset”钮,泵重新工作。
3.进样器的操作
(l)将进样阀手柄和样品保持手柄分别置于“load”位置和开启位置。
(2)将样品保持塞插入进样阀门手柄上的孔中,再将已吸取样品的注射器插入进样口(插到底),把所需体积的样品注入进样阀的样品环中,拔出注射器,把样品保持塞放回原位。
(3)将样品保持旋回关闭位置,测器上的标记按钮,记录色谱图。
